Koks yra šarminės proteazės aktyvumo nustatymo metodas?
Koks yra metodas? Šarminė proteazė aktyvumo aptikimas?
Fermento aktyvumas reiškia fermento gebėjimą katalizuoti tam tikras chemines reakcijas. Fermento aktyvumo dydį galima išreikšti tam tikros cheminės reakcijos, kurią jis katalizuoja atitinkamomis sąlygomis, greičiu. Liaoningo aktyvumo matavimasŠarminė proteazėFermentas iš tikrųjų matuoja fermento katalizuojamos cheminės reakcijos greitį. Fermentinės reakcijos greitį galima išreikšti reakcijos substrato sumažėjimu arba produkto padidėjimu per laiko vienetą. Siekiant jautrumo, paprastai matuojamas per laiko vienetą pagaminto produkto kiekis. Kadangi fermentinės reakcijos greitis laikui bėgant gali palaipsniui mažėti, o jo didėjimo vertė padidėti, norint teisingai išmatuoti fermento aktyvumą, reikia nustatyti pradinį fermentinės reakcijos greitį.
PrincipasŠarminė proteazėFolino metodo aktyvumo nustatymo principas
Šarminė proteazėŠarminėse sąlygose gali katalizuoti kazeino hidrolizę į tiroziną. Tirozinas yra aminorūgštis, turinti fenolio hidroksilo grupę, ir gali reaguoti su folinu (fosforvolframo rūgšties ir fosfomolibdeno rūgšties mišiniu). (Folino fenolio reakcija: folino reagentas yra labai nestabilus šarminėse sąlygose, jį lengva kiekybiškai redukuoti fenolio junginiais, kad susidarytų volframo mėlynojo ir molibdeno mėlynojo mišinys, turintis skirtingą mėlynos spalvos atspalvį.) Naudojant kolorimetriją, galima nustatyti susidariusio tirozino kiekį ir tirozino kiekį, susidariusį hidrolizuojant kazeiną Liaoningo metodu.Šarminė proteazėper laiko vienetą naudojamas fermento aktyvumui išreikšti, taip apskaičiuojant fermento aktyvumą.
Eksperimentinė nustatymo procedūraŠarminė proteazėveikla
Fermento tirpalo paruošimas: tiksliai pasverkite 1 g (±0,001) sausų fermento miltelių, įpilkite 10 ml buferinio tirpalo (2.2.5), ištirpinkite mažoje stiklinėje ir išmaišykite stikline lazdele. Palaikykite šiek tiek pastovėję, viršutinio sluoksnio tirpalą atsargiai supilkite į matavimo kolbą. Į vidurį į nuosėdų dalį įpilkite nedidelį kiekį buferinio tirpalo, 4 kartus išmaišykite ir ištirpinkite tokiu būdu, o galiausiai viską supilkite į 100 ml matavimo kolbą. Praskieskite buferiniu tirpalu iki žymės, gerai suplakite ir filtruokite per keturis marlės sluoksnius. Įsiurbkite 5 ml filtrato, perkelkite jį į 100 ml matavimo kolbą, praskieskite distiliuotu vandeniu iki žymės ir praskieskite fermento skystį 2000 kartų.
ApibrėžimasŠarminė proteazėveikla
ApibrėžimasŠarminė proteazėaktyvumo vienetas: 1 gramasŠarminė proteazėMilteliai gali pagaminti 1 mikrogramą tirozino per minutę esant pH 10 ir 40 °C temperatūrai, kuris laikomas fermento aktyvumo vienetu.
Atsargumo priemonės nustatantŠarminė proteazėveikla
1. Fermento reakcijos temperatūra, pH ir laikas tiesiogiai veikia hidrolizuojamų peptidinių jungčių skaičių, todėl jį reikia griežtai kontroliuoti.
2. Nutraukus reakciją trichloracto rūgštimi, filtratas, gautas filtruojant reakcijos mišinį, turi būti skaidrus.
3. Kadangi folino reagentas yra jautrus rūgštinei aplinkai ir linkęs keistis, matavimo metu užsakyme yra sąlyga. Būtina įpilti natrio karbonato tirpalo, kad susidarytų šarminė aplinka, o tada įpilti folino reagento, kad jis veiktų normaliai.
Aukščiau pateikti susiję straipsniai apie šarminę proteazę, kuriais pasidalinau su jumis. Jei norite sužinoti apie kitus susijusius straipsniusŠarminė proteazė, nedvejodami susisiekite su mumis.
